1. Krevní stopy

1.5. Určení druhové příslušnosti

Jestliže prokážeme ve zkoumané skvrně krev, je důležité zjistit, zda jde o krev lidskou, event. jakému živočišnému druhu náleží. Tento důkaz nelze v žádném případě opominout a má vždy - i při nedostatku vyšetřovaného materiálu - před­nost před zjišťováním dalších identifikačních znaků (např. krevních skupin). Podstatou je průkaz lidské bílkoviny (ev. bílkoviny jiného živočišného druhu) ve skvrně. Z klasických metod se nejčastěji využívá imunoprecipitační reakce, která je dostatečně citlivá a svým provedením poměrně jednoduchá. Jde o zjištění druhově specifické bílkoviny přítomné v krevní skvrně, která s přidaným sérem (protilátkou) precipituje. Testovací precipitační sérum se získává imunizací jiného živočišného druhu. K vlastní precipitaci dochází v místě optimálních koncentraci navzájem se prolínajících a reagujících látek, tj. bílkoviny ze skvrny a precipitačního séra.

          Pozitivní imunoprecipitační reakce charakteru valu mezi 1 a centrální jamkou. 

Vyšetření se provádí těmito metodami:

  • Klasickou Uhlenhutovou zkouškou v tekutém prostředí z výluhu zkoumané skvrny do fyziologického roztokku, a to ve zkumavkách, popř. v kapilárách, kdy po převrstvení výluhu ze skvrny sérem proti lidské bílkovině se u pozitivní reakce do někalika minut vytvoří v místě optimálních koncentrací (lidské bílkoviny a precipitačního séra proti lidské bílkovině) opaleskující prstencový zákal, který můžeme dobře pozorovat v dopadajícím světle proti tmavému pozadí. Po delší době prstencový zákal mizí a précipitát ve vločkách klesá ke dnu. Vždy je nutno stejným způsobem provést i kontrolní vyšetření s výluhem z nepotřísněné podložky, na němž byla zkoumaná skvrna, s nimiž reakce použitého séra musí být negativní. Naopak současně provedené kontrolní vyšetření séra s bilkovinou příslušného živočišného druhu, proti kterému je sérum určeno, musí být pozitivní.

  • Dvojitou radiární imunodifuzí v agaru dle Ouchterlony v pololuhém prostředí do jamky v agaru. Časově i nárokem na množství materiálu však lépe vyhovuje přímé vyšetření přímé vyšetření části skvrny, které se v jamce agarové plotny po opakovaném zakápnutí fyziologickým roztokem přímo vyluhuje a bílkovina skvrny difunduje v agaru proti precipitačním sérům umíslčným v jamkách uspořádaných do tvaru rozet ve čtyřúhelníku či pětiúhelníku. Za 24 hodin můžeme při pozitivní reakci pozorovat v agaru vznik bělavých precipitačních linií, kleré nacházíme mezi jamkou s precipitačním sérem a jamkami s obsahem bílkoviny příslušného živočišného druha. Metoda je výhodná nejen pro svoji citlivost, ale též pro možné zvýraznění výsledků obarvením např. amidočerní, což umožňuje dlouhodobou archivaci.

  • Elektroimunoprecipitací v agaru, kdy je pohyb částic urychlen v elektrickém poli. Výhodou je rychlé získání výsledku při vyšetření eluátu ze skvrny. Nicméně vzhledem k potřebnému času na vyluhování skvrny nepředstavuje toto vyšetření podstatnější časové zkrácení ve srovnání s přímo (tj. bez předcházející eluce) pro­váděnou imunodifuzí.
  • Antiglobulinovým testem, kdy metoda využívá poznatku, že erytrocyty (0 Rh+), které jsou senzibilizované inkompletním sérem anti-D (Rh), aglutinují teprve po přidání séra proti lidskému globulinu (sérum anti-globulinum humanum /SAGH/). Vyšetřujeme výluh ze zkou­mané skvrny. Jestliže ve výluhu z krevní skvrny je přítomen lidský globulin, vy­váže přidané sérum proti lidskému globulinu (SAGH) a zabrání tak hemaglutinaci přidaných připravených senzibilizovaných krvinek (0 Rh+). Pozitivní reakcí, která dokazuje lidskou krev ve skvrně, je tedy inhibice hemaglutinace.

Pomocí precipitačních sér proti bílkovinám živočišných druhů můžeme prokázat ve stopách i jejich krev (např. králičí, prasečí apod.), popř. zjistit, zda skvrna neobsahuje směs krví. Při posuzování přítomnosti bílkoviny příslušného živočišného druhu ve skvrně musíme počítat s příbuzenskou pozitivní reakcí, a to zejména u těchto druhů: člověk - antropoidní opice, kůň - osel - mula - mezek, koza - ovce - muflon, srnec - jelen - daněk, králík - zajíc, slepice - holub - husa - kachna - krocan.